磷酸化多肽操作步骤：
1.剪一适当大小的硝酸纤维素膜并划成25px大小的方格;
2.(磷酸化多肽)用缓冲液A浸湿膜并放于一用同样缓冲液浸湿的滤纸上，使膜平坦;
3.用缓冲液B(含1mg/ml牛血清白蛋白)将样品稀释到合适的浓度，膜上每个点所加的样品其激酶活性在0.5～50pmol单位(1pmol单位代表每分钟转移1pmol 32P的酶量)，当酶比活性在1μmol/min·mg-1时则每个点应加纯酶0.5～50ng;
4.用微量加样器加1～5μl样品于膜上方格中央，待液滴消失后将膜面对含有缓冲液A(包括1～10mg/ml的底物)的Parafilm封口膜(贴于玻璃平板上)，在湿润环境中23℃作用30分钟。大片膜可密封于塑料袋中;
5.在100ml缓冲液A中洗膜并置于一新的Parafilm膜上(加有反应混合物溶液25μl/cm2)，23℃作用5～30分钟;
6.(磷酸化多肽)用缓冲液A 100ml洗膜4次，空气干燥后进行放射自显影。或切成方块进行液闪计数定量。
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